Slide 1: Cosmetic Safety 3.0 Webinaire
_ Webinaire Cc oN Tir Gen’ EvatutioN Cosmetic Safety 3.0 Comment accelérer l'évaluation de l'efficacité et de la sécurité des produits cosmétiques a Vaide d'outils in vitro innovants 6 Octobre 2020 | 16:00-16:45
Slide 2: Today's speakers
Today’s speakers Hanan Osman- Francis Finot, Andy Forreryd, Anna Chérouvrier Ponchet, PKDerm GenEvolutioN SenzaGen Hansson, SenzaGen
Slide 3: Cosmetic Safety 3.0
Cosmetic Safety 3.0 Comment accelérer l’évaluation de l’efficacité et de la sécurité des produits cosmétiques à l’aide d’outils in vitro innovants Webinaire 6 Octobre 2020 | 16:00-16:45 hanan.osman.ponchet@pkderm.com
Slide 4: Les produits cosmétiques
Les produits cosmétiques • Un produit cosmétique est une substance ou un mélange destiné à être mis en contact avec la peau pour – Nettoyer, – Parfumer, – Modifier l’aspect, – Protéger, – Maintenir en bon état… • Les produits de soin de la peau représentent le plus grand segment de l'industrie mondi
Slide 5: Réglementation Européenne des produits cosmétiques
Réglementation Européenne des produits cosmétiques • Le 7ème Amendement à la directive cosmétique 2003/15/EC – Interdiction de tester sur animaux les produits ou ingrédients cosmétiques dans l’UE • Règlement CE n°1223/2009 (Innocuité des produits cosmétiques) – Les produits cosmétiques devraient êtr
Slide 6: Critères produit cosmétique
Critères produit cosmétique • Lors du développement d'un produit topique, nous devons nous assurer: Innocuité Efficacité Tendance du marché 4
Slide 7: Catégories de tests - produit cosmétique
Catégories de tests - produit cosmétique • On distingue 3 catégories de tests: – Les tests de conservation du produit » Le Challenge Test (microbiologie) » Test de stabilité (Etude de la durabilité du produit) – Les tests d’innocuité du produit – Les tests d’efficacité du produit 5
Slide 8: Tests d'innocuité in vitro
Tests d’innocuité in vitro Pénétration cutanée Irritation cutanée et oculaire Phototoxicité Toxicologie génétique Sensibilisation cutanée Evaluer la sécurité du produit cosmétique pour la santé humaine 6
Slide 9: Tests d'efficacité in vitro
Tests d’efficacité in vitro • Les tests d’efficacité permettent de mettre en valeur les propriétés du produit cosmétique, son efficacité et justifient les allégations affichées Effet Anti-inflammatoire Effet Anti-âge revendications affichées Effet Anti-pollution Effet Hydratant Protection solaire Ef
Slide 10: Modèles alternatifs pour tester l'efficacité et l'innocuité
Modèles alternatifs pour tester l’efficacité et l’innocuité • Culture de cellules en 2D • Modèles 3D de peau équivalente • Explants de peau humaine dérivées de peau – Epidermes reconstruits (RHE) – “Gold standard” – Kératinocytes, Fibroblastes – Modèles plus complexes – Mélanocytes, cellules dendrit
Slide 11: Utilisation des modèles in vitro en R&D
Utilisation des modèles in vitro en R&D Stade précoce Stade intéremediaire Stade avancée Ingrédients Ingrédients Produits finis Produits finis Ingrédients Modèles 2D Modèles 3D Explants de peau • Sensibilisation • Irritation • Pénétration cutanée • Inflammation • Sensibilisation • Métabolisme • Viei
Slide 12: Exemples de tests in vitro d'évaluation de l'efficacité et de l'innocuité
Exemples de tests in vitro d’évaluation de l’efficacité et de l’innocuité • Effet anti-inflammatoire (efficacité) • Pénétration cutanée (innocuité et efficacité) 10
Slide 13: PKDERM company
PKDERM company • PKDERM is a French SME committed to help developing the most efficacious and safest product to the patient and consumer • Based on honesty, transparency and agility, PKDERM provides smart innovative in vitro solutions to evaluate the efficacy and safety of products likely to come in
Slide 14: Modèle in vitro d'inflammation
Modèle in vitro d’inflammation • Comparaison modèle 2D et 3D – Kératinocytes – Epiderme reconstruit Traitement qRT-PCR TaqMan® • Traitement: Extraction ARN totaux – Lipopolysacharide (LPS) – Dexamethasone • Analyse 35 4 – TNF-alpha TNF-alpha mRNA expression (Fold 30 (Fold change relative to control)
Slide 15: Test in vitro d'inflammation sur épiderme reconstruit
Test in vitro d’inflammation réalisé sur modèle d’épiderme reconstruite • Example d’un produit fini (crème) 120 35 TNF-α IL-8 TNF-alpha mRNA expression (Fold change relative IL-8 mRNA expression (Fold change relative to 30 100 25 80 to control) control) 20 60 15 40 10 20 5 0 0 Control (Untreated) LP
Slide 16: Modèle in vitro de pénétration cutanée
Modèle in vitro de pénétration cutanée • Explants de peau humaine (Gold standard model) – Evaluer le profile de distribution et l’absorption cutanée en support du profil d’efficacité et de sécurité du produit – On utilse des cellules de diffusion (Franz cells) ou des Transwell® – Peau fraiche ou pea
Slide 17: Modèle in vitro de pénétration cutanée
Modèle in vitro de pénétration cutanée • Méthodes d’analyse – LC-MS/MS; LC-UV; LC-Fluo; LSC • Liquide récepteur • Derme • Epiderme • Stratum corneum – Imagerie : Microscopie, Autoradiographie; MALDI-MSI, … 15
Slide 18: Example of In vitro Dermal absorption study
Example of In vitro Dermal absorption study 16
Slide 19: Modèle in vitro de pénétration cutanée : Comparaison de formulations
Modèle in vitro de pénétration cutanée : Comparaison de 3 formulations • Objectif de l’étude • Mesurer l’absorption cutanée d’un ingredient formulé dans 3 produits Cosmétiques à différentes concentrations • Baume • Huile • Fond de teint 17
Slide 20: Modèle in vitro de pénétration cutanée : Comparaison de formulations
Modèle in vitro de pénétration cutanée : Comparaison de 3 formulations • Peau humaine ex vivo • Cellule de diffusion • Peau entire (congelée) • Surface : 2 cm² • 3 doneurs différents • Volume du compartiment récepteur: 3 mL • Chaque condirion en triplicate sur • Liquide récepteur: PBS + 1% Tween® 80
Slide 21: Modèle in vitro de pénétration cutanée : Comparaison de formulations
Modèle in vitro de pénétration cutanée : Comparaison de 3 formulations • Treatment • Analyse des échantillons • Application: 10 mg/cm² • Broyage de la peau et extraction • Durée de traitement: 24 heures • Analyse par LC-MS/MS • Température: 32°C • Liquide récepteur • Peau 19
Slide 22: Résultats
Résultats PKDerm_.- Innovative solutions 20
Slide 23: Résultats: Pénétration cutanée
Résultats: Pénétration cutanée Comparaison des 3 formulations Skin penetration in ng/cm² Skin penetration in % of applied dose Mean + SEM (N=9) Mean + SEM (N=9) Cosmetic ingredient (% of the applied dose) 60000 7 Cosmetic ingredient (ng/cm²) 50000 6 40000 5 4 30000 3 20000 2 10000 1 0 0 Formulation
Slide 24: How to increase dermal absorption ?
How to increase dermal absorption ? • Differente méthodes physiques existent qui permettent d’augmenter la pénetration cutanée et par consequent augmenter l’efficacité • Microneedle • Skin preparation pad • Tape stripping (reference) Microneedling Skin preparation pad Tape stripping Adhesive tapes D
Slide 25: Comment augmenter la pénétration cutanée?
Comment augmenter la pénétration cutanée? 12,0 Mean + SEM (N = 9) Dermal absorption (% of the applied dose) 10,0 Control 8,0 6,0 4,0 2,0 0,0 Control Microneedle Ambu Pad L’absorption cutanée augmente de 4 fois avec les micro-aiguilles et de 100 fois avec le “skin preparation pad” Osman-Ponchet et al
Slide 26: Conclusion
Conclusion – Differents modèles in vitro existent pour l’évaluation de l’efficacité et la sécurité des produits cosmétiques – Il est important de choisir le bon modèle au bon moment Early stage Late stage Stade précoce Stade intéremediaire Stade avancée Active ingredient Finished product Modèles 2D
Slide 27: Merci pour votre attention
Merci pour votre attention hanan.osman.ponchet@pkderm.com +33 6 70 25 28 56 25
Slide 28: Document confidentiel
07.10.2020 DOCUMENT CONFIDENTIEL 1
Slide 29: Place des tests de toxicologie génétique dans le processus de cancérogenèse
PLACE DES TESTS DE TOXICOLOGIE GENETIQUE DANS LE PROCESSUS DE CANCEROGENESE CANCEROGENE DIRECT ou INDIRECT ( metabolites) Dommages Interactions avec l’ADN Test du Comet Primaire à l’ADN MUTATIONS GENIQUES Lésions de l’ADN Test d’Ames Réparation de l’ADN Test de réparation à l’ADN MUTATIONS Test d’Ab
Slide 30: Mutagénicité/Génotoxicité
Mutagénicité/ Génotoxicité « prédiction cancérogénicité » MPF liquide Etude sur bactéries OCDE 471 – Test d‘Ames /Ames Screening Test Boite de Petri Cellules de Mammifères Aberration chromosomique 5 mg en screening OCDE 487 Micronoyaux dans les lymphocytes humains OCDE 473 Test d‘aberration chromoso
Slide 31: Standard Ames Test: Method (OECD 471)
STANDARD AMES TEST : METHOD (OEDC 471) HISTIDINE (HIS-) AUXOTROPHIQUE [mutants selectionnés par Ames, sans histidine, pas de croissance des souches bactériennes Solution du Activation métabolique mix Produit à tester 5 concentrations S-9 (induit au Phenobarbital-5,6 AGENT MUTAGENE Culture des souche
Slide 32: Les souches les plus couramment utilisées
Les souches les plus couramment utilisées TA1537 TA102, TA104 & E. TA98 TA100 TA1535 &TA97a coli WP2uvrA GC base pairs at GC base pairs at GC base pairs at GC base pairs at the AT base pair at the the primary the primary the primary primary reversion site primary reversion reversion site reversion s
Slide 33: Test d'Ames
Test d’Ames Produit synthétique pur • Le test d’Ames est bien adapté • La pureté devra être supérieure à 95% • La dose forte sera de 5000 µg/boite Références :11 07.10.2020 DOCUMENT CONFIDENTIEL 6
Slide 34: Test d'Ames
Test d’Ames Produit naturel, extrait, mélange complexe • La ligne directrice de l’OCDE recommande 5000 µg/boite • La caractérisation (pureté du produit) est plus difficile à établir • On peut • soit tester le mélange en l’état • Soit en fonction de l’objectif de l’étude, tenir compte de la quantité
Slide 35: Les tests d'Ames, lequel choisir ?
Les tests d’ Ames, lequel choisir ? Test de Methodes Produit testé Type de produit à tester Commentaire mutagenèse Quantité Test d’Ames Standard 250 mg/essai Pour les 95% API (composés 5 souches chimiques purs) BPL Treat and 250 mg/essai Pour les protéines naturelles 5 souches Wash ou synthétiques,
Slide 36: Test du micronoyau in vitro: coloration spécifique
Test du micronoyau in vitro: coloration spécifique télomère- centromère Télomère Télomère Centromère Centromère Coloration spécifique des télomères et centromères permettant: • D’augmenter la spécificité du test • De différencier un effet clastogène (cassure des chromosomes) d’un effet aneugène (per
Slide 37: in vitro Micronucleus test (OECD 487)
in vitro Micronucleus test (OECD 487) • Test standard BPL et • Test de screening non BPL miniaturisé: 15 mg de produit Système biologique: • Sur sang total (préféré) • Sur lignée cellulaire À l’aide de l’Analyseur d’image METAFER, Augmentation de la puissance du test: Traitements 2000 cellules/lames
Slide 38: Test du micronoyau in vitro
Test du micronoyau in vitro Produit pur et produits complexes extraits, mélanges • Comme pour le test d’Ames, pour les produits purs c’est assez simple, il suffit de respecter la ligne directrice • Pour les mélanges, les extraits, on peut être amenés à conduire des essais avec des concentrations qui
Slide 39: Références
Références • 1 A. Hollaender (ed.), Chemical Mutagens © Plenum Press, New York 1973 CHAPTER 24 History of Research on Chemical MutagenesisC. Auerbach Department of Genetics The University Edinburgh, Scotland • 2 2012 Synthetic Point Mutagenesis Roman A.G. Schaeken, Joke J.F.A. van Vugt and Colin Log
Slide 40: Merci
Gent ve auTioN Oso oo are MERCI
Slide 41: Conclusion
CONCLUSION • Grâce au savoir-faire de chacun, nous avons mis au point des nouveaux tests ou des adaptations de tests existants (miniaturisation) qui peuvent vous apporter des solutions innovantes: • Dans les différents domaines d’intérêt pour vous: efficacité, sensibilisation et sécurité • Ils répon
Slide 42: Le Futur
Le Futur • Une des force de l’industrie cosmétique est l’utilisation exclusive des tests in vitro • Les premiers tests utilisés présentaient des lacunes (déficiences en P53, télomère intra cellulaires) et les modèles sur TK6, V79, CHO etc sont de moins en moins utilisés. • Le progrès dans la connais
Slide 43: Document confidentiel
07.10.2020 DOCUMENT CONFIDENTIEL 16
Slide 44: Sensibilisation cutanée, le test génomique GARD
Sensibilisation cutanée, le test génomique GARD Webinaire Cosmetic 3.0, 6 Octobre 2020
Slide 45: SenzaGen en quelques mots
SenzaGen en quelques mots L’entreprise Les services Le réseau La vision • Spin-out de l’université de Lund • Les essais GARD in vitro pour • Vente directe de services • Remplacer les tests sur tester la sensibilisation cutanée depuis le QG, la filiale animaux • Côtée sur Nasdaq First North, et respi
Slide 46: Remplacer les tests sur animaux avec la technologie moderne
Remplacer les tests sur animaux avec la technologie moderne GARD™ platform Cellules humaines Génomique Machine learning GARD 70-75% 75-80% 90-95% Précision vs. Précision Précision données • Biomarqueurs simples • Signatures de biomarqueurs humaines • Puissance: pas d’information • Information sur la
Slide 47: La plateforme GARD – comment ça marche?
™ GARD La plateforme GARD® – comment ça marche? [for safer cosmetics] SYSTÈME SET DE DONNÉES BIOLOGIQUE D’ENTRAÎNEMENT CÉLLULAIRE In vitro skin and respiratory sensitization March 19th, 2020 MODÈLE DE SIGNATURE GENOMIC DE PRÉDICTION BIOMARQUEURS BIOMARKER GÉNOMIQUES SIGNATURE
Slide 48: GARD en 3 étapes
GARD® en 3 étapes SENSIBILISANT NON-SENSIBILISANT Étape 1. Étape 2. Étape 3. Les cellules SenzaCells™ sont Les niveaux d’expression génomique L’outil GDAA (GARD Data Analysis exposées à la substance à tester à des 200 biomarqueurs du GARDskin Application) établit une prédiction concentration détermi
Slide 49: Le portefeuille de tests GARD
Le portefeuille de tests GARD® Sensibilisation cutanée GARD®skin* GARD®potency* 200 gènes 51 gènes Test in vitro pour identification de Test in vitro complémentaire au sensibilisants cutanés chimiques GARDskin pour classification de la potentiels avec une précision à plus de puissance sensibilisante
Slide 50: Performance
Performance GARD®skin | GARD®potency Test sensibilisation cutanée • 200 biomarqueurs génomiques • 94%: précision* • 93% sensibilité – peu de faux positifs (7%) • 96% spécificité – peu de faux négatifs (4%) • Classification sans besoin d’un avis expert subjectif Classification de la puissance des sen
Slide 51: GARDskin Dose-Response
GARD®skin Dose-Response • GARDskin Dose-Response: nouvelle méthode pour l’évaluation quantitative de la puissance sensibilisante, adaptée du test GARDskin avec la même signature de biomarqueurs • GARDskin Dose-Response permet d’obtenir: • Classification d’ingrédients sur la base de leur puissance de
Slide 52: Conformité – réglementation et standards de qualité
Conformité – réglementation et standards de qualité OCDE • GARDskin et GARDpotency inclus dans le programme Test Guideline Program CRODA delivers innovative speciality (TGP no. 4.106) chemicals to a range of industries including health and beauty, engine REACH et CLP lubricants, plastics and many mo
Slide 53: Applications et études de cas
Applications et études de cas
Slide 54: Solvants compatibles avec GARD
Solvants compatibles avec GARD Acétone | DMF | DMSO | Isopropanol | Ethanol | Glycerol | Huile d’Olive | Huile de sésame Valeur de décision GARD Véhicule: DMSO Véhicule: Eau Véhicule: DMF/Glycerol GARD Decision Value Véhicule Substance GARD Decision Value Véhicule Substance Véhicule Substance test t
Slide 55: Application de GARDskin pour des substances difficiles à tester
Application de GARDskin pour des substances difficiles à tester
Slide 56: Étude de cas: Mélanges complexes – émollients à base d'huile
Étude de cas Mélanges complexes – émollients à base d’huile Contexte • Fournisseur leader de matières premières naturelles pour produits cosmétiques et d’entretien • Émollient à base d’huile (mélange): odeur inattendue trouvée dans un lot de production Valeurs de decision GARDskin (DVs) • Contaminan
Slide 57: En résumé
En résumé GARD: une combinaison unique de tests sur la sensibilisation cutanée Évaluation des risques: mélanges Sensibilisants forts ou faibles? Données “Dose-response” complexes, parfums, surfactants, etc GARDskin pour la prédiction des dangers GARDpotency pour classification de la GARDskin Dose-Re
Slide 58: Contactez-nous pour plus d'information
Contactez-nous pour plus d’information www.senzagen.com Anna Chérouvrier Hansson Ashwani Sharma, PhD Andy Forreryd, PhD Responsable développement d’affaires Key Account Manager Europe Key Account Manager & Scientific Liaison anna.c.hansson@senzagen.com ashwani.sharma@senzagen.com andy.forreryd@senza
Slide 59: Q&A
Q&A Hanan Osman-Ponchet, Francis Finot, Andy Forreryd, Anna Chérouvrier Hansson, PKDerm GenEvolutioN SenzaGen SenzaGen hanan.osman.ponchet@pkderm.com francis.finot@genevolution.fr andy.forreryd@senzagen.com anna.c.hansson@senzagen.com +33 (0) 6 70 25 28 56 +33 (0) 6 65 75 94 78 +46 (0) 734 331777 +4